急性脑出血患者血肿周围组织IL－17与NF－κB p65的表达

任  鑫

赤壁市人民医院脑外科，湖北 赤壁 437300

作者简介：任鑫(1968－)，男，本科，副主任医师。研究方向：神经外科学。Email：1052755365@qq.com

【摘要】  目的  分析急性脑出血患者血肿周围组织中IL－17和NF－κB p65表达水平，探讨IL－17/NF－κB信号通路的生物学意义。方法  将赤壁市人民医院2014－03—2015－09收治的48例急性脑出血患者依照手术取材时间不同分为4组(＜6 h组，6～24 h组，＞24～72 h组，＞72 h组)，6例远离血肿病灶区的脑组织作对照组；检测IL－17 mRNA及NF－κB p65核蛋白水平。结果  对照组与＜6 h组IL－17 mRNA表达水平比较无明显差异(P＞0.05)，其余三实验组IL－17 mRNA表达水平显著高于对照组(P＜0.05)；＞24～72 h组血肿周围组织中IL－17 mRNA水平最高，差异均有统计学意义(P＜0.05)；实验组血肿周围组织中NF－κB p65水平均显著高于对照组(P＜0.05)；＞24～72 h组血肿周围组织中NF－κB p65水平最高(P＜0.05)。结论  急性脑出血患者血肿周围组织通过上调IL－17及NF－κB p65的表达加重炎性反应，诱发细胞损伤，造成病情恶化。

【关键词】  急性脑出血；血肿周围组织；IL－17；NF－κB p65；mRNA；炎性反应；细胞损伤

【中图分类号】  R743.34    【文献标识码】  A    【文章编号】  1673－5110(2018)03－0314－04  DOI：10.12083/SYSJ.2018.03.080

REN Xin

Department of Cerebral Surgery，Chibi People's Hospital，Chibi 437300，China

【Abstract】  Objective  To analyze the expression level of IL－17 and NF－κB p65 of Hematoma surrounding tissue in the acute cerebral hemorrhage patients，and discuss the biological significance of signal path of IL－17/NF－κB p65.Methods  48 Acute cerebral hemorrhage patients，who were treated in our hospital from Mar 2014 to Sep 2015，were divided into 4 groups according to the surgical samples took at different time(less than 6h group，6h and 24h group，24h to 72h group，more than 72h group)，6 tissue from the lesion area of the hematoma were treated as the control group；The RT－PCR method was used to detect the expression level of IL－17 mRNA in biological samples；The Western blot was used to detect NF－κB p65 nuclear protein levels in Inspection material.Results  There was no significant difference in IL－17 mRNA expression level between the control group and the less than 6h group (P＞0.05)．The expression level of IL－17 mRNA in the other three test groups was significantly higher than that in the control group (P＜0.05)；The IL－17 mRNA levels was the highest of patients with 24h to 72h，and the differences between each group had statistical significance (P＜0.05)；The levels of NF－κB p65 in the surrounding tissues of the 4 experimental groups were significantly higher than those in the control group (P＜0.05)；The NF－κB p65 levels of Hematoma surrounding tissue was the highest of patients with 24h to 72h，and the differences between each group has statistical significance (P＜0.05)．Conclusion  Through increase the expression of IL－17 and NF－κB p65 in Hematoma surrounding tissue in patients with acute cerebral hemorrhage，it can aggravate the inflammatory response，Induced cell damage，Causing the disease to deteriorate.

【Key words】  Acute cerebral hemorrhage；Hematoma surrounding tissue；IL－17；NF－κB p65；mRNA；Inflammatory response；Cell damage

      急性脑出血是临床中较为常见的颅内疾病，对患者的健康安全造成严重威胁^[1]。研究指出，在组织损伤及炎症反应中有诸多机制参与该过程^[2]。IL－17是与自身免疫疾病密切相关的细胞活性因子，其可激活下游NF－κB p65因子而发挥生物学活性，在疾病的发生及发展过程中发挥极其重要的作用^[3]。IL－17/NF－κB信号通路广泛存在于体内多种细胞中，参与诸多疾病的病理性变化过程^[4]。本研究对急性脑出血患者血肿周围组织中IL－17和NF－κB p65表达水平进行分析，探讨IL－17/NF－κB信号通路发挥的生物学活性。

1．1  一般资料  经我院伦理委员会批准，选取赤壁市人民医院神经外科2014－03—2015－09收治的48例急性脑出血患者(图1)，依照手术取材时间不同分为4组，分别为＜6 h组、6～24 h组、＞24～72 h组、＞72 h组，每组12例。将血肿病灶区1 cm左右的脑组织作为实验检材，另取6例远离血肿病灶区的脑组织作为对照组。＜6 h组男7例，女5例，年龄(68.3±13.2)岁；6～24 h组中男8例，女4例，年龄(69.2±14.2)岁；＞24～72 h组男7例，女5例，年龄(67.3±11.2)岁；＞72 h组男6例，女6例，年龄(66.9±14.1)岁；对照组男3例，女3例，年龄(65.1±15.3)岁。5组性别、年龄等差异无统计学意义(P＞0.05)。

1．2  入组标准^[5]  (1)血小板计数＞8×10¹⁰个/L，且无出血倾向；(2)未出现昏迷及大面积脑梗死病灶；(3)心、肝、肾功能基本正常；(4)患者及家属对本次研究知情并签署知情同意书。

1．3  排除标准^[6]  (1)入院前1周内使用过蛇毒类制剂或纤溶酶药物；(2)3个月内接受过手术治疗；(3)处于哺乳或妊娠期；(4)对本次研究使用药品过敏；(5)主动退出研究。

1．4  方法  手术过程中取出生物检材，及时置于液氮中。后集中使用RT－PCR法检测生物检材中IL－17 mRNA的表达水平，其中PCR引物，由生工(上海)生物工程有限公司合成，RT－PCR试剂盒购买自普迈(上海)生物有限公司。使用Western blot法检测检材中NF－κB p65核蛋白水平，其中核蛋白提取试剂盒购买自生工(上海)生物工程有限公司，NF－κB p65抗体购买自万类(沈阳)生物有限公司。

1．5  统计学方法  使用SPSS 18.0软件处理原始数据，计量资料用均数±标准差(x±s)表示，使用单因素方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2．1  IL－17 mRNA表达水平  对照组与＜6 h组IL－17 mRNA表达水平比较无明显差异(P＞0.05)，其余三实验组IL－17 mRNA表达水平显著高于对照组(P＜0.05)。＞24～72 h组血肿周围组织中IL－17 mRNA水平最高 (P＜0.05)。见表1、图2。

表1  各组IL－17 mRNA表达水平比较  (x±s)

组别	n	IL－17/β－actin
对照组	6	0.051±0.019
＜6 h组	12	0.083±0.034
6～24 h组	12	0.354±0.057*#
＞24～72 h组	12	0.742±0.049*#^
＞72 h	12	0.518±0.038*#^ a

注：与对照组比较，^*P＜0.05；与＜6 h组比较，^#P＜0.05；与6～24 h组比较，^{^}P＜0.05；与＞24～72 h组比较，^aP＜0.05

2．2  NF－κB p65表达水平  四实验组血肿周围组织中NF－κB p65水平均显著高于对照组(P＜0.05)。＞24～72 h组血肿周围组织中NF－κB p65水平最高(P＜0.05)。见表2、图3。

表2  各组NF－κB p65表达水平  (x±s)

组别	n	NF－κB p65/β－actin
对照组	6	0.175±0.079
＜6 h组	12	0.248±0.092*
6～24 h组	12	0.620±0.098*#
＞24～72 h组	12	0.982±0.101*#^
＞72 h	12	0.551±0.120*#^ a

注：与对照组比较，^*P＜0.05；与＜6 h组比较，^#P＜0.05；与6～24 h组比较，^{^}P＜0.05；与＞24～72 h组比较，^aP＜0.05

 

 

      大量研究显示，在急性脑出血的发病及发展过程中，诸多机制均参与其中，炎症反应是参与该过程重要的病理性反应^[7－8]。有学者对早期急性脑出血发病前期分析发现，单核细胞、中性粒细胞等出现迁徙、渗出等现象，造成血肿周围组织炎症反应加剧，多种炎症介质大量聚集，造成神经细胞凋亡^[9]。体内包括小胶质细胞在内的多种细胞会分泌补体及其他细胞因子，参与血肿病灶区的炎症级联反应^[10]。此外，有学者研究发现，黏附因子也是参与急性脑出血病灶区炎症反应及细胞聚集的重要生物活性物质之一^[11]。

      IL－17是人体内十分重要的具有广泛生物学活性的细胞因子之一，其参与体内大量的炎性反应，在人炎症性疾病的发生及发展过程中扮演十分重要的作用^[12]。研究证实，当IL－17与其受体结合后，激活MAPK、NF－κB及JAKs信号通路发挥生物学活性^[13]。NF－κB是人体内重要的转录调节因子，调控人体内诱导趋化因子、细胞因子、补体、黏附因子等细胞因子的转录。当病原微生物、细胞因子、活性氧等因素刺激细胞后，可激活NF－κB活性，并形成较为复杂的正反馈调节环路，与机体的病理性改变密切相关^[14]。

      本研究显示，急性脑出血患者血肿病灶区周围组织中IL－17及NF－κB p65的表达水平明显偏高，提示IL－17及NF－κB p65的表达与急性脑出血血肿周围组织的炎性反应密切相关，且两指标的动态变化在时间上具有高度的一致性。IL－17/NF－κB p65通路激活后，促进细胞的水通道蛋白及基质金属蛋白酶的表达与激活，诱导神经细胞凋亡，加速病灶区及周围组织损伤，加速急性脑出血血肿的发生^[15－16]。有研究指出，急性脑出血后可能导致血Th细胞免疫调节功能失调，导致Th17型细胞活性增强，释放大量IL－17等细胞因子^[17－18]。而IL－17则通过血液向病灶部位聚集，并将大量中性粒细胞募集至病灶处，进一步加重炎症反应^[19－20]。本研究显示，当IL－17介导的炎症信号通路激活后，导致病灶区及周围正常组织内细胞代谢异常，过度激活细胞内NF－κB，使其磷酸化水平升高，出现大量NF－κB p65聚集。

      急性脑出血患者血肿周围组织通过上调IL－17及NF－κB p65的表达及活性，加重炎性反应，诱发细胞损伤，造成病情恶化。提示治疗时可考虑通过调节IL－17及NF－κB p65活性对急性脑出血患者进行干预。

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(收稿2017－04－15  修回2018－01－12)

本文编辑：夏保军

本文引用信息：任鑫．急性脑出血患者血肿周围组织IL－17与NF－κBp65的表达[J]．中国实用神经疾病杂志，2018，21(3)：314－317.